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不同来源间充质干细胞条件培养基对内源性衰老细胞作用的比较

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文章附图

图片介绍

图1 衰老人皮肤成纤维细胞的形态及 β-半乳糖苷酶染色(×100)

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结果:人皮肤成纤维细胞传至45代以上,细胞呈扁平状,逐渐排列不规则,胞核增大,细胞增殖速度明显减缓,见图1A。经β-半乳糖苷酶染色后,人皮肤成纤维细胞被染成蓝绿色,综合人皮肤成纤维细胞形态的改变可证明细胞发生了复制性衰老,见图1B


图2 各组衰老人皮肤成纤维细胞的增殖活性比较

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结果:CCK-8检测结果见图2。在24-72 h,4种间充质干细胞条件培养基组的细胞活性显著高于对照组(P < 0.01),说明人脂肪、羊水、脐带、胎盘来源间充质干细胞条件培养基能提高衰老人皮肤成纤维细胞的活力,从结果可看出,脂肪间充质干细胞条件培养基的效果最好。


图3 各组衰老人皮肤成纤维细胞 β-半乳糖苷酶染色(×100)

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结果:培养72 h后,SA-β-gal染色结果显示,脂肪间充质干细胞条件培养基组和胎盘间充质干细胞条件培养基组蓝绿色的衰老细胞较少,与对照组比较差异有显著性意义(P < 0.01),见图3,说明上述2种条件培养基具有显著抗细胞衰老作用。


图4 各组衰老人皮肤成纤维细胞的活性氧荧光强度

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结果:4种间充质干细胞条件培养基组细胞活性氧荧光强度均低于对照组(P < 0.01),其中胎盘间充质干细胞条件培养基组与脐带间充质干细胞条件培养基组差异无显著性意义(P > 0.05);脂肪间充质干细胞条件培养基组和羊水间充质干细胞条件培养基组差异也无显著性意义(P > 0.05),但这2组细胞荧光强度显著低于胎盘间充质干细胞条件培养基组和脐带间充质干细胞条件培养基组(P < 0.05),说明脂肪、羊水来源间充质干细胞条件培养基降低衰老人皮肤成纤维细胞活性氧荧光强度的效果最好,见图4


图5 各组衰老人皮肤成纤维细胞的衰老相关基因表达

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结果:衰老基因p16和p53在胎盘间充质干细胞条件培养基组和脐带间充质干细胞条件培养基组表达较高,且高于对照组(P < 0.01);脂肪间充质干细胞条件培养基组p16基因表达低于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05),但p53基因表达较高;羊水间充质干细胞条件培养基组p16表达量与对照组差异无显著性意义,p53的表达显著低于对照组(P < 0.01)图5A。与对照组相比,脂肪间充质干细胞条件培养基组COL1和KLOTHO基因表达最高,见图5B


图片来源

郑桂纯,赵姝灿,黄丽贞,张晓芳,王丙云,陈胜锋,陈志胜. 不同来源间充质干细胞条件培养基对内源性衰老细胞作用的比较[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(21): 3357-3363.


文章快速阅读

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文题释义

活性氧:正常情况下细胞内活性氧的产生和清除处于平衡,但在细胞衰老进程或刺激因子存在时,其胞内清除活性氧的调节机制失衡,活性氧可诱发膜脂过氧化、蛋白质过氧化、DNA损伤等,导致细胞结构和功能受损。

KLOTHO基因:被誉为衰老抑制基因,当其表达量上调时可以延缓人体衰老,当其表达量下调时会出现类似于衰老的表现。


文章摘要

背景:随着经济的发展,人们对美的追求越来越高,抗衰老研究成为当今的研究热点。干细胞是具有自我更新能力和多向分化能力的细胞,间充质干细胞是其中的一种。研究表明间充质干细胞能通过旁分泌作用修复损伤衰老细胞,但对于不同来源间充质干细胞条件培养基的抗皮肤衰老作用研究甚少。

目的:比较人脂肪、羊水、胎盘、脐带来源间充质干细胞条件培养基对自然衰老皮肤成纤维细胞的抗衰老作用。

方法:制备人脂肪、羊水、胎盘、脐带4种不同来源的间充质干细胞条件培养基,添加到自然衰老皮肤成纤维细胞中,采用CCK-8法检测细胞活力、β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老率、DCFH-DA探针检测活性氧含量以及qPCR检测p16p53COL1KLOTHO基因表达量。

结果与结论:4种间充质干细胞条件培养基均能提高皮肤成纤维细胞的活力,其中脂肪间充质干细胞条件培养基的效果最好,β-半乳糖苷酶染色率最低;4种间充质干细胞条件培养基均能降低活性氧含量,脂肪和羊水来源间充质干细胞条件培养基组的活性氧含量最低;p16p53在胎盘和脐带间充质干细胞条件培养基组的表达均高于对照组,在羊水来源间充质干细胞条件培养基组的表达较低,脂肪间充质干细胞条件培养基组p16表达显著低于对照组,但p53的表达较高;COL1基因表达除羊水间充质干细胞条件培养基组外,其他3组均显著高于对照组,KLOTHO基因表达除胎盘间充质干细胞条件培养基组外,其他3组均显著高于对照组,且脂肪间充质干细胞条件培养基组的表达最高;结果显示,4种不同来源间充质干细胞条件培养基能在一定程度上延缓细胞衰老,但作用效果存在差异,其作用机制还有待进一步研究。


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http://www.crter.org/CN/article/openArticlePDF.jsp?id=14739