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浓缩生长因子对人牙龈成纤维细胞增殖与分化的作用

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文章附图

图片介绍

图1 浓缩生长因子萃取液制备

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结果:在无菌条件下,抽取3例健康男性患者静脉血于5 mL到真空管;静脉血经过变速离心后,分成3层结构:红细胞碎片位于最底层,浓缩生长因子凝胶位于中间层,乏细胞上清液位于最上层,见图1A。浓缩生长因子凝胶呈半透明胶冻状,质地坚韧且富有弹性,并且表面光滑,见图1B;浓缩生长因子凝胶中的水分被挤出后,浓缩生长因子凝胶呈薄膜状结构,见图1C;在DMEM中加入浓缩生长因子膜,见图1D


图2 CCK-8 法检测各组人牙龈成纤维细胞增殖变化

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结果:实验第1天,100%浓缩生长因子萃取液组与对照组相比,人牙龈成纤维细胞增殖的效果显著(P < 0.05)。在实验第2,3天,与对照组相比,50%浓缩生长因子萃取液组增殖的效果显著(P < 0.05),100%浓缩生长因子萃取液组数值显著增加(P < 0.01);而25%浓缩生长因子萃取液组与对照组相比,人牙龈成纤维细胞增殖的促进效果不显著(P > 0.05),见图2



图3 各组碱性磷酸酶活性变化

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结果:经过7,14天的培养,与对照组相比,100%浓缩生长因子萃取液组碱性磷酸酶活性显著升高(P < 0.01),同时50%浓缩生长因子萃取液组在这2个时间点与对照组相比碱性磷酸酶活性均升高(P < 0.05),见图3



图4 各组矿化结节数量变化(茜素红染色,×40)

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结果:在干预培养21 d后,两组细胞在显微镜下均可见无定形物质(显微镜:IX73,Olympus Corporation,Tokyo,Japan)。并且经过茜素红染色后,这些无定形物质均呈深红色结节状,形态多种多样,并且100%浓缩生长因子萃取液组比对照组形成更多的钙结节,见图4,这进一步说明浓缩生长因子萃取液能够促进人牙龈成纤维细胞的成骨分化。


图5 浓缩生长因子萃取液对成骨相关基因 RUNX2 mRNA 表达水平的影响

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图6 浓缩生长因子萃取液对成骨相关基因骨钙素 mRNA 表达水平的影响

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结果:在干预培养第3,7,14天,对成骨相关基因RUNX2和骨钙素的表达进行RT-PCR检测,结果见图56



图7 典型病例

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结果:上颌左侧中切牙即刻种植并同期置入浓缩生长因子膜后,软组织愈合良好,通过暂冠塑形获得比较满意的穿龈轮廓,戴入永久冠后牙龈轮廓和形态得到较好的维持,龈缘无明显退缩,龈乳头获得较好的充盈。X射线影像片检查显示种植体形成了良好的骨整合,术后14个月与术后3个月对比,种植体周围骨量增加,见图7



图片来源

李小菊,宋光保,杨剑珍,魏 波,武 斌. 浓缩生长因子对人牙龈成纤维细胞增殖与分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(21): 3342-3348.


文章快速阅读

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文题释义

浓缩生长因子:是第3代血小板浓缩萃取物质即浓缩生长因子,由于制备方法简单不添加任何物质,自体获取,不存在免疫排斥反应,其中含有高浓度生长因子,是一种理想的生物材料。

人牙龈成纤维细胞:是牙龈结缔组织中主体细胞,不仅具有活跃的自身更新能力和可以合成胶原纤维能力,而且具有一定的潜在成骨能力,在牙周组织的修复再生中起重要作用。


文章摘要


背景:血液中含有大量具有再生和修复功能的生长因子及血小板成分,对软硬组织再生具有促进作用。

目的:通过体外实验研究浓缩生长因子萃取液对人牙龈成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。通过临床体内试验研究浓缩生长因子在口腔种植中促进软硬组织再生的作用。

方法:选择深圳市龙华区人民医院口腔科就诊患者。①体外实验:用离心法制取患者静脉血浓缩生长因子,分离培养人牙龈成纤维细胞;实验分4组:对照组采用完全培养基培养,其他3组于完全培养基中添加体积分数25%50%100%的浓缩生长因子萃取液培养;②体内试验:对患者患牙进行微创拔牙同时植入种植体,并放置浓缩生长因子用于诱导软硬组织的快速愈合,6个月后分别进行二期种植手术,采用改良信封瓣增加唇侧牙龈厚度及增加近远中软组织的量进行牙龈塑形3个月,获得与邻牙相协调的软组织轮廓。

结果与结论:①体外实验结果:CCK-8检测,半定量碱性磷酸酶活性测定,矿化颗粒量和成骨相关基因RT-PCR检测显示,与对照组相比,培养3 d50%100%浓缩生长因子萃取液组人牙龈成纤维细胞增殖能力显著增强,培养第14天体积分数100%浓缩生长因子萃取液组的碱性磷酸酶活性升高,矿化分子量明显增多,成骨基因RUNX2和骨钙素mRNA的表达量升高;②体内试验结果:浓缩生长因子可以促进患者口腔种植体周围骨组织再生,与术后3个月对比,术后14个月种植体周围骨量显著增加,龈缘位置无明显退缩,龈乳头充盈牙间隙;③结果证实:浓缩生长因子萃取液可促进人牙龈成纤维细胞增殖与分化,可促进口腔种植体周围软硬组织再生。


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http://www.crter.org/CN/article/openArticlePDF.jsp?id=14737